Во время всей работы с ооцитами / эмбрионами, они должны быть защищены от физического / химического изменения, а именно:
А.Температура
Б.Осмолярность и рН культуральной среды
Состав питательной среды для человеческого ЭКО заметно развивалась в последние годы с более широким использованием «последовательной медиа культуры», которые включают ряд медиа и буферов, предназначенных для создания оптимальной поддержки каждой стадии процесса от ооцитов через оплодотворение до эмбрионального расщепления бластоцисты.
Правильное использование всех питательных сред требует использования специальных атмосфер, которые, как минимум, обогащены диоксидом углерода.
Кроме того, в настоящее время признается, что человеческий эмбрион имеет лучшее развитие и потенциал имплантации, если напряжение кислорода ниже, чем в обычном воздухе. Тем не менее, существует большая путаница между концентрациями СО2 и О2 (в объемныхпроцентах) и их парциальным давлением. Во-первых, на возвышенностях не только снижается атмосферное давление, но и изменяются относительные пропорции кислорода и азота (и другие незначительные газы), например,на уровне моря существует 20,95% О2, на высоте 1000 м есть только 18,55% О2 и на 1600 м (например, Денвер) есть только 17,2%. те же изменения влияют и на содержание СО2, так что, если мы хотим достичь рН в растворе 25 мМ двууглекислой соли на уровне моря, то требуется 6,0% СО2 в соответствии с уравнением Хендерсон-Хассельбаха, в противном случае рН раствора будет смещаться и ионы будут теряться до тех пор, пока раствор не достигнет нового равновесия. Но в 1600 м над уровнем моря необходимо почти 7,5% СО2 для достижения правильного парциального давления (ррСО2), чтобы сохранить ионы бикарбоната в растворе и рН 7,3.
Одной из основных проблем с буфером двууглекислых сред является то, что им требуется много времени, чтобы достичь равновесия, но газ выходит очень быстро. Недавние исследования [4] показали, что 50 мкл капель среды под маслом дегазируют после удаления из СО2 инкубатора, чтобы рН был сдвинут выше 7,45 в течение 2 минут, а после замены чашки в СО2 инкубаторе пройдет 35 минут, чтобы повторно уравновесить рН (всего около 15 минут для чашек Петри, содержащих 5 мл среды). Эти различия обусловлены относительной величиной содержания дифференциала СО2 между уравновешенной средой и в воздухе, а также между атмосферой инкубатора и, частично, из-за загазованности среды.
Наконец, в этой связи, если культуральную среду подвергают воздействию воздуха, что нехорошо, насыщенной парами воды, то будет испарительная потеря из среду с сопутствующим увеличением средней осмолярности. Испарение также выше при более высоких температурах. В то время как культура под маслом помогает бороться с этой проблемой в течение извлечения чашки с ооцитами, как правило, открыты без масляного слоя (что значительно усложнит процедуру).
В.Качество воздуха
Из-за высоки темпов метаболизма и деления клеток, эмбрионы очень чувствительны к токсичным химическим веществам, в результате чего ЭКО / ЭКО лаборатории и процедурные комнаты имеют особо высокий риск загрязнения летучими органическими соединениями (ЛОС) и другими загрязнителями воздуха.
Распространенным заблуждением является то, что НЕРА (с высокой эффективностью частиц воздуха) фильтрация удаляет газообразные органические и неорганические молекулы. НЕРА, как следует из ее названия, является высокоэффективной системой для удаления частиц из воздуха (по стандарту эффективность в 99,97% для частиц размером 0,3 мкм), а не газообразных молекул с низким молекулярным весом.