А мы на одной и той же странице? Руководство по номенклатуре и аннотации при покадровой съемке
Feb 09, 2017

Оценка эмбрионов «из пробирки» за последние годы значительно улучшилась благодаря введению технологии покадровой съемки, которая дает нам новые инструменты для оценки морфологических характеристик и имплантационного потенциала. Эта технология сформировала полную картину о различных событиях, происходящих между статическими периодами наблюдения, а также показала, каким образом сроки проведения этих мероприятий могут предсказать жизнеспособность эмбриона до имплантации. Эта новая оценка привела к появлению нового термина «морфокинетика», которая является другим способом классификации эмбрионов по сравнению с классической оценкой.

Морфокинетика в сравнении с традиционной системой оценки

Классическая система оценки не может охватить то, что может показать метод покадровой съемки. Мы создали технический документ, который содержит практическую терминологию, которой могут воспользоваться пользователи этого метода, что может помочь им в полной мере воспользоваться преимуществами этой технологии. Использование этой же номенклатуры в клиниках также позволит нам сравнить и обсудить данные, являющиеся результатом аннотации, маркировки и оценки.

Морфокинетические технологии

• Начало замедленной съемки ( t0)

Для обычного процесса ЭКО это время, при котором происходит оплодотворение. Для процесса ИКСИ – это точка в середине времени, когда начинается и заканчивается инъекция когорты ооцитов пациента. Перед началом покадровой съемки программное обеспечение Miri TL предложит вам выбрать процесс, ЭКО или ИКСИ. Этот момент времени имеет важное значение, т.к. время последующих событий измеряется в часах после инсеминации / инъекции, если не указано иное.

• Пронуклеарное выцветание (tPNf)

Время, когда оба (или последний) PN исчезают. Эта заметка производится по первому кадру, при котором эмбрион все еще находится на одноклеточной стадии, но пронуклеусы больше не визуализируются.

• Расщепление от t2 до t8

Время первого расщепления клеток - t2, а t3 – время трех дискретных клеток. 8 дискретных клеток – t8. Отмечается на первом кадре, когда вы впервые наблюдаете полное разделение бластомеров.

• Морула (tM)

Это стадия уплотнения морулы, уплотнение может быть полным или частичным. Статус и время уплотнения играют определенную роль в том, как будет развиваться следующий этап, бластоцисты.

• Время начала бластуляции (tSB)

Это начальная стадия бластуляции и в настоящее время наличие полости может рассматриваться как серебро.

• Время полной бластоцисты (tB)

Бластоциста начинает расширяться, это тот этап, когда пеллюцида становится тонким.

• Время расширения бластоцисты (tEB)

На этой стадии происходит расширение бластоцисты, и пеллюцид становится тонким.

• Время вылупления бластоцисты (tHB)

Период вылупления эмбриона, и экструзии эмбриона из пеллюцида

Посмотрите видео ниже в качестве примера того, как был аннотирован эмбрион. Вы можете еще раз изучить терминологию, описанную выше, пока не станете комфортно делать аннотацию. Временные отметки каждого события можно сравнить с литературными моделями, такими как Meseguer (2011) [1], Rubio (2014) [2], Basile (2015) [3] или Desai (2014) [4] или моделью, применяющейся в вашей лаборатории. Все большее число исследований свидетельствуют о том, что тайминги развития различаются у эмбрионов с полным потенциалом развития по сравнению с эмбрионами с без или с ограниченным потенциалом [5].

Аннотация различных морфокинетических переменных при помощи Miri TL

Программное обеспечение Miri TL для просмотра с левой стороны будет отображать набор событий и параметров, которые вы можете использовать для аннотирования эмбриона. Аннотация представляет собой процесс временной маркировки конкретного события / параметра, например, если наблюдаемый t2 произошел при 27 HPI, то вы можете нажать кнопку “t2” в списке событий из левого столбца, и аннотированный параметр t2 на 27 HPI будет отображаться в правой колонке. По умолчанию список событий содержит t2, t3, t4, t5, 56, t7, t8, морулы, бластоцисты и ранние бластоцисты. Очень важно точно и последовательно отмечать и аннотировать эти параметры, так как их значения будут использоваться программным обеспечением для автоматического расчета продолжительного клеточного цикла (сс) и синхронности (s) клеточных делений. Если вам кажется, что вы совершили ошибку и неправильно аннотировали событие, просто дважды щелкните аннотацию на правой стороне, она вернется к списку событий на левой стороне, и вы сможете повторно аннотировать это событие. Кроме того, очень важно, чтобы вы аннотировали все события, так как программное обеспечение не может рассчитать длину клеточного цикла или синхронность клеточных делений без всех аннотированных событий. Дополнительные таблицы оценки содержат симметрию, многоядерность, PN оценку и фрагментацию.

Программное обеспечение Miri TL для просмотра является адаптивным. События, перечисленные в левой колонке можно настроить так, чтобы включить и другие параметры, которых нет в настройках по умолчанию. Есть более продвинутые параметры, которые можно включить в вашу систему классификации в заданный промежуток времени. Эта статья охватывает только те события, которые имеются в настройках по умолчанию, они практичны и обычно используются пользователями системы замедленной съемки, чтобы иметь более полное представление о развитии эмбриона.

Краткое описание морфокинетических переменных и их определение (Источник: Ciray и др., 2014[6])

Необходимость согласованного решения

Надежный выбор жизнеспособных эмбрионов играет решающую роль при ЭКО [5]. Использование технологии покадровой съемки, морфокинетическая оценка помогают при выборе лучшего эмбриона. И с увеличением числа клиник, использующих эту технологию, оценка жизнеспособности эмбриона изменяется в зависимости от клиники. Карта согласованной оценки содействует оценке развития эмбриона и необходима для последовательной и более точной оценки жизнеспособности эмбриона [2].

Источники:

1. Meseguer M, Herrero J, Tejera A, Hilligsoe K, Ramsing N, Remohi J (2011).

The use of morphokinetics as a predictor of embryo implantation. Human Reproduction, Vol. 26, No.10 pp. 2658-2771, 2011.

2. Rubio I, Galan A, Larreategui Z, Ayerdi F, Bellver J, Herrero J, Meseguer M. (2014).

Clinical validation of embryo culture and selection by morphokinetic analysis: a randomized, controlled trial of the Embryoscope. Fertil Steril 2014; 102: 1287-1294.e5.

3. Basile N, Vime P, Florensa M, Ruiz B, Velasco G, Remohi J, Meseguer M. (2015).

The use of morphokinetics as a predictor of implantation: a multicentric study to define and validate an algorithm for embryo selection. Human Reproduction, Vol. 30, No.2 pp. 276-283, 2015.

4. Desai N, Ploskonka S, Goodman LR, Austin C, Goldberg J, Falcone T (2014).

Analysis of embryo morphokinetics, multinucleation and cleavage anomalies using continuous time-lapse monitoring in blastocyst transfer cycles. Reprod Biol Endocrinol 2014; 12: 54-9.

5. Kirkegaard, K., Ahlstrom, A., Ingerslev, H., & Hardarson, T. (2014).

Choosing the best embryo by time lapse versus standard morphology. Elsevier Inc. http://dx.doi.org/10.1016/j.fertnstert.2014.11.003.

6. Ciray, H., Campbell, A., Agerholm, I., Aguilar, J., Chamayou, S., Esbert, M., & Sayed, S. (2014).

Proposed guidelines on the nomenclature and annotation of dynamic human embryo monitoring by a time-lapse user group. Human Reproduction, Vol. 29, No.12 pp. 2650-2660, 2014.

Полную версию статьи Вы можете получить здесь